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在《侦探狗狗史酷比》系列中，有许多经典的反派角色，以下是一些最为人熟知的：猫人（Catman）：在《The Old Cat and Mouse Game》一集中出现，是一个穿着猫装的罪犯，他和他的暹罗猫一起行动。木乃伊（Mummy）：在《Mummy’s the Word》一集中出现，是一个古埃及的木乃伊，后来被揭露是人为操控的。海盗（Pirate）：在《Long John Scrappy》一集中出现，是一个海盗幽灵，最终被揭露是人为假扮的。隐形鬼（Invisible ghosts）：在《Scooby Ghosts West》一集中出现，是一群看似无形的幽灵，实际上是由旅店老板操控的。沼泽女巫（Swamp Witch）：在《Swamp Witch》一集中出现，是一个居住在沼泽地的女巫，最终被揭露是人为假扮的。蜡像馆大师（Wax master）：在《Waxworld》一集中出现，是一个能够操控蜡像的大师，最终被揭露是人为操控的。皇后红心（Queen of Hearts）：在《Scooby in Wonderland》一集中出现，是一个来自爱丽丝梦游仙境的反派角色，最终被揭露是人为假扮的。爬行幽灵（Roller Ghoster）：在《Roller Ghoster Ride》一集中出现，是一个在游乐园中出现的幽灵，最终被揭露是人为操控的。僵尸角斗士（Zombie Gladiator）：在《Pompeii and Circumstance》一集中出现，是一个古罗马的僵尸角斗士，实际上是由他人操控的。吸血鬼（Vampire）：在《The Vampire Strikes Back》一集中出现，是一个传统的吸血鬼形象，最终被揭露是人为假扮的。这些反派角色通常在每集的结尾被揭露为普通人假扮的，这是《侦探狗狗史酷比》系列的一个标志性特点，即所有的“怪物”和“幽灵”背后都有人为的解释。这些角色为系列增添了悬疑和幽默，使其成为了经典。